Πώς υπολογίζεται η συγκέντρωση DNA χρησιμοποιώντας φασματοφωτόμετρο;
Πώς υπολογίζεται η συγκέντρωση DNA χρησιμοποιώντας φασματοφωτόμετρο;

Βίντεο: Πώς υπολογίζεται η συγκέντρωση DNA χρησιμοποιώντας φασματοφωτόμετρο;

Βίντεο: Πώς υπολογίζεται η συγκέντρωση DNA χρησιμοποιώντας φασματοφωτόμετρο;
Βίντεο: How to read the genome and build a human being | Riccardo Sabatini 2024, Απρίλιος
Anonim

Συγκέντρωση DNA είναι εκτιμάται από μετρώντας την απορρόφηση στα 260nm, ρυθμίζοντας το Α260 μέτρηση θολότητας ( μετριέται από απορρόφηση στα 320 nm), πολλαπλασιάζοντας με ο παράγοντας αραίωσης και χρησιμοποιώντας η σχέση που ένα Α260 1,0 = 50 μg/ml καθαρού dsDNA.

Οι άνθρωποι ρωτούν επίσης, πώς βρίσκετε τη συγκέντρωση και την καθαρότητα του DNA;

Να αξιολογήσει Καθαρότητα DNA , μετρήστε την απορρόφηση από 230 nm έως 320 nm για να ανιχνεύσετε άλλους πιθανούς ρύπους. Η πιο κοινή υπολογισμός καθαρότητας είναι ο λόγος της απορρόφησης στα 260 nm διαιρούμενος με την ένδειξη στα 280 nm. Καλής ποιότητας DNA θα έχει Α260/ΕΝΑ280 αναλογία 1,7–2,0.

Ομοίως, τι είναι μια καλή συγκέντρωση DNA; ΕΝΑ Καλός ποιότητα DNA Το δείγμα πρέπει να έχει Α260/ΕΝΑ280 αναλογία 1,7-2,0 και Α260/ΕΝΑ230 αναλογία μεγαλύτερη από 1,5, αλλά επειδή η ευαισθησία των διαφορετικών τεχνικών σε αυτές τις προσμείξεις ποικίλλει, αυτές οι τιμές θα πρέπει να λαμβάνονται μόνο ως οδηγός για την καθαρότητα του δείγματός σας.

Σχετικά με αυτό, πώς υπολογίζει το NanoDrop τη συγκέντρωση DNA;

Πολλαπλασιάζετε την τιμή απορρόφησης στα 260 nm με έναν σταθερό συντελεστή (είναι 50 για DNA ) και παίρνετε το Συγκέντρωση DNA . Voilá. (Εντάξει, τεχνικά είναι το A260 ενός δείγματος πάχους 10 mm που πολλαπλασιάζεται επί 50. NanoDrop εκφράζει το A260 σαν το δείγμα να είχε πάχος 10 mm, όπως σε μια τυπική κυψελίδα).

Γιατί έπρεπε να χρησιμοποιήσουμε ένα φασματοφωτόμετρο για να ποσοτικοποιήσουμε το DNA μας;

ΕΝΑ φασματοφωτόμετρο είναι μπορεί να προσδιορίσει τις μέσες συγκεντρώσεις των νουκλεϊκών οξέων DNA ή RNA που υπάρχει σε ένα μείγμα, καθώς και η καθαρότητά τους. Χρησιμοποιώντας ο νόμος Beer-Lambert το είναι είναι δυνατό να συσχετιστεί η ποσότητα του φωτός που απορροφάται με τη συγκέντρωση του απορροφητικού μορίου.

Συνιστάται:

Πώς υπολογίζεται η πιθανή πτώση σε ένα κύκλωμα;

Πώς υπολογίζεται η πιθανή πτώση σε ένα κύκλωμα;

Πτώση τάσης: Παράλληλο κύκλωμα Αυτό σημαίνει ότι η πτώση τάσης στο καθένα είναι απλώς η συνολική τάση του κυκλώματος διαιρεμένη με τον αριθμό των αντιστάσεων στο κύκλωμα ή 24 V/3 = 8 V

Πώς υπολογίζεται η τιμή MZ;

Πώς υπολογίζεται η τιμή MZ;

Ο αριθμός των ηλεκτρονίων που αφαιρούνται είναι ο αριθμός φορτίου (για θετικά ιόντα). Το m/z αντιπροσωπεύει τη μάζα διαιρούμενη με τον αριθμό φορτίου και ο οριζόντιος άξονας σε ένα φάσμα μάζας εκφράζεται σε μονάδες m/z. Δεδομένου ότι το z είναι σχεδόν πάντα 1 με το GCMS, η τιμή m/z συχνά θεωρείται ότι είναι η μάζα

Πώς υπολογίζεται η έλξη που προκαλείται από ανύψωση;

Πώς υπολογίζεται η έλξη που προκαλείται από ανύψωση;

Ο επαγόμενος συντελεστής οπισθέλκουσας είναι ίσος με το τετράγωνο του συντελεστή ανύψωσης (Cl) διαιρούμενο με την ποσότητα: pi (3,14159) επί τον λόγο διαστάσεων (Ar) επί έναν παράγοντα απόδοσης (e). Ο λόγος διαστάσεων είναι το τετράγωνο του ανοίγματος διαιρούμενο με την περιοχή των φτερών

Πώς υπολογίζεται η απόσταση του γενετικού χάρτη;

Πώς υπολογίζεται η απόσταση του γενετικού χάρτη;

Η συχνότητα διασταύρωσης (% ανασυνδυασμός) μεταξύ δύο τόπων σχετίζεται άμεσα με τη φυσική απόσταση μεταξύ αυτών των δύο τόπων. Το ποσοστό ανασυνδυασμού σε δοκιμαστικό σταυρό ισούται με την απόσταση χάρτη (1 μονάδα χάρτη = 1 % ανασυνδυασμός)

Πώς βρίσκετε τη συγκέντρωση του DNA από την απορρόφηση;

Πώς βρίσκετε τη συγκέντρωση του DNA από την απορρόφηση;

Η συγκέντρωση του DNA υπολογίζεται μετρώντας την απορρόφηση στα 260 nm, προσαρμόζοντας τη μέτρηση A260 για θολότητα (μετρούμενη με απορρόφηση στα 320 nm), πολλαπλασιάζοντας με τον παράγοντα αραίωσης και χρησιμοποιώντας τη σχέση ότι ένα A260 1,0 = 50 μg/ml καθαρού dsDNA