Πίνακας περιεχομένων:
Βίντεο: Πώς φορτώνετε την ηλεκτροφόρηση γέλης;
2024 Συγγραφέας: Miles Stephen | [email protected]. Τελευταία τροποποίηση: 2023-12-15 23:35
Φόρτωση δειγμάτων και εκτέλεση τζελ αγαρόζης:
- Προσθήκη φόρτωση ρυθμιστικό σε κάθε δείγμα DNA σας.
- Μόλις στερεοποιηθεί, τοποθετούμε την αγαρόζη γέλη μέσα στο γέλη κουτί ( ηλεκτροφόρηση μονάδα).
- Γέμισμα γέλη κουτί με 1xTAE (ή TBE) μέχρι το γέλη καλύπτεται.
- Προσεκτικά φορτώνω μια σκάλα μοριακού βάρους στην πρώτη λωρίδα του γέλη .
Σε σχέση με αυτό, πόσο DNA χρειάζεται να φορτώσετε για ηλεκτροφόρηση γέλης;
Η ποσότητα του DNA για φόρτωση ανά φρεάτιο είναι μεταβλητό. Η ελάχιστη ποσότητα DNA που μπορεί να ανιχνευθεί με βρωμιούχο αιθίδιο είναι 10 ng. DNA ποσότητες έως και 100 ng ανά φρεάτιο θα έχουν ως αποτέλεσμα μια αιχμηρή, καθαρή ταινία σε ένα χρωματισμένο βρωμιούχο αιθίδιο γέλη.
Επιπλέον, γιατί χρησιμοποιείται ρυθμιστικό διάλυμα στην ηλεκτροφόρηση γέλης αντί για νερό; ο ρυθμιστής είναι απαραίτητο για να διατηρηθεί το pH του διαλύματος DNA σε σχεδόν ουδέτερο επίπεδο γιατί αν μπορεί να γίνει όξινο μέσω της ηλεκτρόλυσης. Τα ηλεκτρικά ρεύματα που προκαλούνται από τα ηλεκτρόδια μπορούν να προκαλέσουν νερό μόρια για διάσπαση και απελευθέρωση ιόντων Η+.
Οι άνθρωποι ρωτούν επίσης, γιατί χρησιμοποιείται ένας δείκτης στην ηλεκτροφόρηση γέλης;
Τα μικρότερα θραύσματα κινούνται γρηγορότερα, και επομένως μακρύτερα, από τα μεγαλύτερα καθώς περνούν μέσα από το γέλη . Γιατί χρησιμοποιείται ένας δείκτης όταν τρέχουν τα θραύσματα μέσα από το γέλη ? ΕΝΑ σημάδι περιέχει θραύσματα DNA γνωστού μεγέθους. Μαρκαδόροι τρέχουν σε κάθε γέλη για σύγκριση με τα άγνωστα θραύσματα σε άλλα γέλη λωρίδες.
Πόσο DNA μπορεί να δει κανείς σε ένα τζελ αγαρόζης;
Πλέον τζελ αγαρόζης γίνονται μεταξύ 0,7% και 2%. 0,7% τζελ θα δείχνουν καλό διαχωρισμό (ανάλυση) των μεγάλων DNA θραύσματα (5–10 kb) και 2% τζελ θα παρουσιάζουν καλή ανάλυση για μικρά θραύσματα (0,2–1 kb).
Συνιστάται:
Πώς φορτώνετε ένα δείγμα στη χρωματογραφία στήλης;
Για να φορτώσετε τη στήλη: Διαλύστε το δείγμα στην ελάχιστη ποσότητα διαλύτη (5–10 σταγόνες). Χρησιμοποιώντας μια πιπέτα ή μια σύριγγα με μια παχιά βελόνα, στάξτε το δείγμα απευθείας στην κορυφή του πυριτίου. Μόλις προστεθεί ολόκληρο το δείγμα, αφήστε τη στήλη να στραγγίσει έτσι ώστε το επίπεδο του διαλύτη να αγγίζει την κορυφή του πυριτίου
Γιατί τοποθετήθηκε το θετικό ηλεκτρόδιο στο κάτω μέρος της γέλης;
Δείγματα DNA φορτώνονται σε φρεάτια στο άκρο αρνητικού ηλεκτροδίου της γέλης. Η τροφοδοσία ενεργοποιείται και θραύσματα DNA μεταναστεύουν μέσω γέλης (προς το θετικό ηλεκτρόδιο). Τα μεγαλύτερα θραύσματα βρίσκονται κοντά στην κορυφή της γέλης (αρνητικό ηλεκτρόδιο, από όπου ξεκίνησαν) και τα μικρότερα θραύσματα βρίσκονται κοντά στο κάτω μέρος (θετικό ηλεκτρόδιο)
Ποιος παράγοντας χρησιμοποιεί η ηλεκτροφόρηση γέλης για τον διαχωρισμό του κουίζ μορίων DNA;
Το πήκτωμα λειτουργεί σαν κόσκινο, διαχωρίζοντας διαφορετικά μόρια DNA ανάλογα με το μέγεθός τους, καθώς μικρότερα μόρια DNA θα μπορούν να κινούνται μέσα στο πήκτωμα πιο γρήγορα από τα μεγαλύτερα μόρια. Μια χημική ουσία στο τζελ από την οποία περνά το DNA συνδέεται με το DNA και είναι ορατή κάτω από το υπεριώδες φως
Τι είναι θετικός και αρνητικός μάρτυρας στην ηλεκτροφόρηση γέλης;
Οι θετικοί και οι αρνητικοί μάρτυρες είναι δείγματα που χρησιμοποιούνται για την επιβεβαίωση της εγκυρότητας του πειράματος ηλεκτροφόρησης γέλης. Οι θετικοί μάρτυρες είναι δείγματα που περιέχουν γνωστά θραύσματα DNA ή πρωτεΐνης και μεταναστεύουν με συγκεκριμένο τρόπο στο πήκτωμα. Αρνητικός έλεγχος είναι ένα δείγμα που δεν περιέχει DNA ή πρωτεΐνη
Τι είναι το θετικό ηλεκτρόδιο στην ηλεκτροφόρηση;
Χωρίς γέλη, όλο το DNA θα πήγαινε κατευθείαν στο θετικό ηλεκτρόδιο (ονομάζεται άνοδος). Το μέγεθος των πόρων ελέγχει τον ρυθμό με τον οποίο κινείται το DNA. Μια σχετικά υψηλή συγκέντρωση 1% αγαρόζης χρησιμοποιείται για τον διαχωρισμό μικρών θραυσμάτων DNA ενώ χαμηλότερες συγκεντρώσεις χρησιμοποιούνται για το διαχωρισμό μεγάλων θραυσμάτων