Πόσο κοστίζει η μετατροπή μιας απολίνωσης;
Πόσο κοστίζει η μετατροπή μιας απολίνωσης;

Βίντεο: Πόσο κοστίζει η μετατροπή μιας απολίνωσης;

Βίντεο: Πόσο κοστίζει η μετατροπή μιας απολίνωσης;
Βίντεο: Πως θα γίνει και πόσο κοστίζει η μετατροπή από φυσικό αέριο σε πετρέλαιο | Σήμερα | 13/09/2022 2024, Νοέμβριος
Anonim

Μεταμόρφωση . Προσθέστε μεταξύ 1-5 μl απολίνωση μίγμα σε ικανά κύτταρα για μεταμόρφωση . Επεκτάθηκε απολίνωση με PEG προκαλεί πτώση μεταμόρφωση αποτελεσματικότητα (Γρήγορη Απολίνωση Εργαλειοθήκη). Η ηλεκτροδιάτρηση συνιστάται για μεγάλες κατασκευές (>10.000 bp).

Από εδώ, πόσο προϊόν απολίνωσης χρειάζομαι για τη μεταμόρφωση;

Μεταμόρφωση . Προσθέστε μεταξύ 1-5 μl απολίνωση μίγμα σε ικανά κύτταρα για μεταμόρφωση . Επεκτάθηκε απολίνωση με PEG προκαλεί πτώση μεταμόρφωση αποτελεσματικότητα (Γρήγορη Απολίνωση Εργαλειοθήκη). Η ηλεκτροδιάτρηση συνιστάται για μεγάλες κατασκευές (>10.000 bp).

Στη συνέχεια, το ερώτημα είναι, τι είναι η απολίνωση και ο μετασχηματισμός; Σε ένα τυπικό πείραμα κλωνοποίησης, οι ερευνητές εισάγουν πρώτα ένα κομμάτι DNA, όπως ένα γονίδιο, σε ένα κυκλικό κομμάτι DNA που ονομάζεται πλασμίδιο. Αυτό το βήμα χρησιμοποιεί ένζυμα περιορισμού και DNA λιγάση και ονομάζεται α απολίνωση . Μετά από μια απολίνωση , το επόμενο βήμα είναι η μεταφορά του DNA σε βακτήρια σε μια διαδικασία που ονομάζεται μεταμόρφωση.

Στη συνέχεια, μπορεί επίσης να αναρωτηθεί, πόσο DNA χρειάζεται για μια απολίνωση;

Η συνολική συγκέντρωση φορέα + ένθετο πρέπει να είναι μεταξύ 1-10 Μg/ml για αποτελεσματική απολίνωση . Διάνυσμα: Συνιστώνται μοριακές αναλογίες εισαγωγής μεταξύ 1:1 και 1:10 (το 1:3 είναι τυπικό). Εάν δεν είστε σίγουροι για το δικό σας DNA συγκεντρώσεις, πραγματοποιούν πολλαπλές απολινώσεις με ποικίλες αναλογίες.

Πόσο καιρό μπορείτε να αποθηκεύσετε μια αντίδραση απολίνωσης;

Οι απολινώσεις μπορούν να γίνει σε θερμοκρασία δωματίου ή πιο κρύα (σκεφτείτε 12-16°C) κατά τη διάρκεια της νύχτας ή ακόμα και για μερικές ημέρες, αν εσύ είναι πραγματικά απασχολημένος. Μπορείς επίσης αποθηκεύστε μια απολίνωση στο ψυγείο και το βγάζουμε αργότερα για να συνεχίσουμε να το κολλάμε σε θερμοκρασία δωματίου για όσο μακρύς όπως απαιτείται.

Συνιστάται: